四月轻盈的脚步，在柔软的雨丝中穿行，在盈盈的笑意中，柳梢绿了，草地渐茵。在春的旋律里，宛如窈窕淑女，欲语还羞，曼妙的舞姿，柔美的气息，给我们带来嫩绿朦胧的遐想。

试剂的准备

按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。人ELISA试剂盒中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液、洗涤液应用pH计测量。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用，一般室温平衡不低于30min。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

加样

在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样（一般不建议使用）。有些指标检测（如间接法ELISA）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1min。加酶结合物工作液和底物工作液时可用多道移液器，使加液过程在短时间内完成。

保温

在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育。

ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育。

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